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#科学网#科学家开发新策略衡量记忆T细胞反应( 二 )


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在新研究中 ， 作者们开发了一个更新版本 ， 即GLIPH2 ， 它可以以更高的速度、准确性和效率分析多达数百万个TCR序列 。
通常 ， 通过计算每个个体的TCR重复数来进行克隆扩增分析 ， 人们专注于单个个体的T细胞克隆扩增变化 。
与此互补的是 ， GLIPH2分析使我们能够从整个群体的角度关注个体之间共享的特异性 ， 这将极大的推动疫苗候选抗原的发现 。
该方法的第二部分是通过筛选Mtb的整个基因组 ， 来寻找新的CD4+T细胞抗原 。
通过第一步的GLIPH分析 ， 作者们确定出了上百个TCR类群 。
为了确定它们的抗原 ， 研发了一套高效的T细胞报告系统 ， 一方面通过在细胞系J76中表达感兴趣的TCR来筛选抗原 ， 另一方面通过在K562细胞系中稳定表达CD80和HLA-DM ， 构建出了强大的人工APC（aAPC） ， 可以通过内源性II类抗原加工途径自然加工并呈递多肽 ， 从而给任何给定的TCR筛选蛋白质抗原提供了有效的方法 。
#科学网#科学家开发新策略衡量记忆T细胞反应
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该方法显示出了一系列优势：
首先 ， 小鼠研究中仅有少数几个MHC等位基因限制 ， 而在人体研究中涉及超过20,000种HLA等位基因 ， 所以需要一个体外细胞系统来稳定表达HLA等位基因 。 稳定表达CD80和HLA-DM的K562细胞系可作为强大的人工APC（aAPC） ， 可以表达任意的HLA等位基因进行筛选 。
其次 ， aAPC可以通过内源性II类抗原加工途径自然加工并呈递肽抗原 ， 促使作者们发现蛋白质与肽刺激之间的差异 。
第三 ， 在整个研究中 ， TCR激活被用来捕获抗原特异性T细胞并发现抗原 ， 因此它可以捕获具有低TCR亲和力的抗原 ， 通过依赖强结合亲和力的测定法可能会遗漏这些抗原 。
第四 ， 作者的报告系统使用EC50来测量TCR和多肽MHC的相互作用 。 这种定量测量将有助于鉴定最具免疫原性的抗原 ， 以及识别能力最强的TCR 。
综上所述 ， 本文有效地把病原体特异性CD4+T细胞库分析和寻找新抗原结合起来 ， 并成功地解码了T细胞对于Mtb病原体的反应 。
该平台也可以用于研究其他与疾病相关的T细胞反应 ， 例如疟疾 ， 肿瘤和自身免疫性疾病中T细胞的功能 。
论文信息：
DOI：https://doi.org/10.1038/s41587-020-0505-4
参考文献
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