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生物医学科研实验|BCA法及Bradford法蛋白浓度测定的区别？

蛋白定量最常用的两种方法BCA法、Bradford（考马斯亮蓝）法 。
【生物医学科研实验|BCA法及Bradford法蛋白浓度测定的区别？】现将其原理与实验选择中略微差别简介如下
生物医学科研实验|BCA法及Bradford法蛋白浓度测定的区别？
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原理
BCA法原理：碱性条件下 ， 蛋白将Cu2+还原为Cu+ ， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物 ， 吸光强度与蛋白浓度成正比 。 测定其在562nm处的吸收值 ， 并与标准曲线对比 ， 即可计算待测蛋白的浓度 。
Bradford法原理：考马斯亮蓝在酸性游离状态下呈棕红色 ， 最大光吸收在465nm ， 当它与蛋白质结合后变为蓝色 ， 最大光吸收在595nm 。 在一定的浓度范围内 ， 蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比 ， 通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量 。 蛋白质和考马斯亮蓝结合 ， 在2-5min左右的时间内达到平衡 ， 完成反应十分迅速 ， 其结合物在室温下1小时内保持稳定 。
选择区别
BCA法：该方法可以兼容样品中高达5%的SDS ， 5%的TritonX-100 ， 5%的Tween20、60、80 。 但该方法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响 ， 需确保EDTA低于10mM ， 无EGTA ， 二硫苏糖醇(DTT)低于1mM ， β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01% 。
Bradford法：该方法样品中β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)的浓度可高达1M ， 二硫苏糖醇(DTT)的浓度可高达5mM 。 但该方法受略高浓度的去垢剂影响 ， 需确保SDS低于0.01% ， TritonX-100低于0.05% ， Tween20、60、80低于0.015% 。


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