枇 杷
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枇杷 , 属蔷薇科植物 , 其花、果、叶均可入药 。 成熟枇杷鲜果不仅酸甜可口、营养丰富 , 具有止咳润肺、消炎镇痛、延缓衰老等生理功效;还具有抗动脉硬化、抗血栓、抗胃溃疡、抗菌、抗突变的生物活性及皮肤保健和美容等功效 。
枇杷是一种季节性水果 , 应季的时候产量较大 , 且不耐储存和运输 , 极易变质 。 目前枇杷果实除鲜食外 , 其加工产品仍然以果汁、罐头、果酱以及干制为主 , 少量的枇杷酒及醋饮料 , 枇杷的深加工及其综合利用还有待加强 , 目前尚未见枇杷酵素的报道 。
【枇杷|枇杷酵素的抗氧化能力有多高?】本研究以枇杷酵素为研究对象 , 通过测定枇杷自然发酵过程中pH值、可滴定酸、有机酸、总酚含量变化来分析枇杷发酵过程中活性成分的变化;以DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除能力、羟基自由基清除能力和超氧阴离子自由基清除能力为抗氧化性指标 , 评价枇杷酵素的抗氧化活性 , 为枇杷酵素的综合开发提供相关理论依据 。
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材料与方法
材料与试剂
枇杷、白砂糖(食品级)、标准品没食子酸、乳酸、乙酸、无水酒精、无水亚硫酸钠、氢氧化钠、水杨酸钠、硫酸亚铁、焦性没食子酸、过硫酸钾、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾(均为分析纯)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)(分析纯)、邻苯三酚 , 2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、1,1-二苯基-2-苦苯肼(DPPH)(均为分析纯)、福林酚(10%)溶液、浓盐酸、浓硫酸、过氧化氢(均为分析纯) 。
仪器与设备
1200高效液相色谱仪、WT-B千分之一分析天平、SHZ-S(Ⅲ)循环水式多用真空泵、BEST超纯水机、DZF-6094真空干燥箱、Mikro-220R离心机、752紫外分光光度计、DW-86L626海尔超低温冰箱、Eppendorf移液枪、PHS-3C雷磁pH计、HWS-24型电热恒温水浴锅 。
试验方法
制备枇杷酵素;测定pH值和可滴定酸;测定酵素中的有机酸含量;测定总酚含量;测定DPPH自由基清除能力;测定ABTS+自由基清除能力;测定羟基自由基清除能力;测定超氧阴离子自由基清除能力 。
数据处理
每组试验均重复3次 , 采用origin9.1进行绘图 , 结果以平均值±标准差表示 , SPSS25软件进行单因素方差分析、相关性分析和主成分分析 , 当P
结果与分析
枇杷酵素发酵过程中pH值与可滴定酸的变化
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图1 发酵过程中pH值和可滴定酸含量的变化
由图1可知 , pH值和可滴定酸含量在发酵过程中呈现相反的变化趋势 。
酵素发酵过程中有机酸含量的变化
自然发酵酵素中酵母菌、醋酸菌和乳酸菌是最常见的微生物 。 有机酸标准曲线见表1 。 枇杷酵素中乳酸和乙酸含量的变化如图2 。
表1 有机酸标准曲线
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图2 发酵过程中乳酸和乙酸含量的变化
酵素发酵过程中总酚含量的变化
酚类物质具有较强的抗氧化活性 。 以没食子酸为标品 , 标准曲线为Y=0.0013x-0.0265,R2=0.9996 。 酵素发酵过程中总酚含量变化如图3所示 。
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图3 发酵过程中总酚含量变化
酵素发酵过程中DPPH自由基清除率的变化
DPPH是一种很稳定的自由基 , 被广泛用于判断抗氧化剂的清除自由基能力 。 枇杷酵素发酵过程中DPPH自由基清除率的变化如图4所示 。
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图4 发酵过程中DPPH自由基清除能力变化
酵素发酵过程中ABTS+自由基清除率的变化
枇杷酵素发酵过程中ABTS+自由基清除率的变化如图5所示 。
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图5 发酵过程中ABTS+自由基清除能力变化
酵素发酵过程中羟自由基清除率的变化
羟自由基是氧自由基中最为活泼的自由基 , 过量的羟自由基会引起生物分子的严重损伤 。 枇杷酵素发酵过程中羟自由基清除率的变化如图6所示 。
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图6 发酵过程中羟自由基清除能力变化
酵素发酵过程中超氧阴离子自由基清除率的变化
超氧阴离子自由基在活性氧物质的形成中起重要作用 , 主要损害细胞膜 。 枇杷酵素发酵过程中超氧阴离子自由基清除率的变化如图7所示 。
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图7 发酵过程中超氧阴离子自由基清除能力变化
相关性分析
根据Pearson相关分析结果见表2 。
表2 枇杷酵素各参数相关分析
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枇杷酵素发酵过程中4种体外抗氧化性指标均与总酚含量呈显著正相关(P
结论
本文采用不同的自由基体系和Pearson相关分析对枇杷酵素体外抗氧化活性进行了较为全面的研究 。 从试验结果可以看出 , 枇杷酵素对ABTS+自由基和DPPH自由基具有很强的清除作用 , 并对羟自由基和超氧阴离子自由基也有一定的清除作用 , 这表明枇杷酵素能够清除体内多余自由基 , 具有较好的抗氧化能力 。 枇杷酵素中富含的乳酸、乙酸和多酚类化合物等活性成分 , 具有良好的抗氧化活性 。 综合考虑时间成本与CEI值 , 发酵至40d时CEI值达到最大 , 因此确定枇杷酵素的发酵终点为40d 。
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