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@iPSC基因编辑细胞-为各类疾病研究打开新大门( 二 )


@iPSC基因编辑细胞-为各类疾病研究打开新大门
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iPSC的AAVS1安全位点敲入凝血因子9 ， 所分化获得的肝细胞可用于治疗乙型血友病
目前治疗血友病最普遍的方法是替代疗法 ， 但这种方法有病毒感染的风险 ， 且是一种需要终生持续治疗的方法 。只有基因治疗才能从根本上治愈血友病 ， CRISPR/Cas9系统可用于血友病的基因治疗 。细胞中凝血因子8和9（F8和F9）突变是引起血友病的主要原因 。之前就有研究表明F9是更有效的基因治疗目标 。通过构建以AAVS1位点为靶点的AAVS1-Cas9-sgRNA质粒和AAVS1-EF1α-F9 cDNA嘌呤霉素donor 载体 ， 并将其导入iPSC中 。将F9 cDNA插入AAVS1位点的iPSCs分化为肝细胞 ， 在培养上清中成功检测到人因子IX（hFIX）抗原和活性 。最后 ， 通过脾脏注射将肝细胞移植到非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷病（NOD/SCID）小鼠体内 ， 从而起到治疗乙型血友病的作用 。
CRISPR-U?可以通过使用通过核转染法高效地将gRNA、Cas9和Donor共转入iPSC细胞中 ， 进行药筛 ， 药筛完成后挑选单克隆培养 。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序 ， 筛选出敲入纯合的阳性克隆 。（Lyu, Cuicui, et al.）
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iPSC诱导分化 ， 使“自体移植”不再遥不可及
人胚胎干细胞来源于早期胚胎而使其研究备受伦理争议 ， 而且人胚胎干细胞来源的分化细胞进行异体移植时存在排斥反应 ， 在一定程度上限制了其临床应用 。iPSC可以诱导分化为不同种类的细胞用于科学研究 。经过日积月累的研究开发 ， 目前已经可以从患者组织（如成纤维细胞）或现有的iPSC中产生具有功能的、成熟的肝细胞、神经细胞、T细胞、心肌细胞、造血干细胞和胰岛细胞等 。
iPSC诱导分化流程：
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