伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于100ml蒸馏水中 。
稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸 。
系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶 。
培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜 。
实验步骤
样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化 , 调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片 , 用PBS 洗涤3次 。
样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min 。
染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤 。
分色:镜下观察 , 若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤 。
染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤 。
吹干或自然晾干细胞 爬片后,中性树胶封片 。
若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min , 伊红5min即可 。
实验结果及注意事项
** 实验结果**
细胞核呈蓝色,细胞质 , 肌纤维,胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色 。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色
注意事项:
1. 染色时调节pH值很重要 。如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色 。因此 , 要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深 。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸 。
2. 切片染苏木精后,分色这一步是关键,应在显微镜下控制进行,一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为佳 。如果过分延长分色时间将导致染色太浅 , 应重新染色后再行分色 。
3. 切片经酒精脱水后,入二甲苯时可出现白色不透明状态,此为脱水不彻底,应将切片退回无水酒精,更换酒精、二甲苯,以求彻底脱水与透明 。
文章插图
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