引物二聚体形成原因?pcr产物放置一段时间后引物二聚体变多? _引物二聚体

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本篇文章给大家谈谈引物二聚体,以及引物二聚体形成原因对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站！
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什么是引物二聚体引物二聚体介绍
pcr 扩增产生大量引物二聚体的原因
什么是引物二聚体引物二聚体介绍
pcr产物放置一段时间后引物二聚体变多？
引物二聚体可以在凝胶成像中检测出来吗
如何判断两个引物是否形成二聚体

Q1：什么是引物二聚体引物二聚体介绍
1、引物二聚体是引物的3端间相互错配扩增形成的。
2、引物判誉二裂乱聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度，降肆冲档低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。
Q2：pcr 扩增产生大量引物二聚体的原因
引物设计不合理，两条或一睁册搏条引物悉祥的3`端有互补序列，造成自己配对延伸而扩增。
建议重新设计引物姿贺，，或者降低退火温度、增加模板和引物的量试下，，不过能不能扩出来看运气了。
Q3：什么是引物二聚体引物二聚体介绍
1. 引物二聚体是引物3端不匹配放大形成的。
2. 引物二聚体的出现是必然的，但这或多或少是个问题。电泳时引物二聚体带的缺失并不意味着没有链宽二棚神聚体，而是其含量低，我们肉眼是看不到的。提高PCR的严格程度(包括提高退火温度和降低引物浓度)可以大大降低二聚体的浓度棚和亮。
Q4：pcr产物放置一段时间后引物二聚体变多？
不会，引物二聚体的产生原因是引物之间存在大量的碱基互补配对孝液洞的情况，引物在PCR过程已被消耗，放置中不会新巧枯增二聚体。在PCR体系中减少引物用量，或者提高埋袜退火温度可减少二聚体的产生。
Q5：引物二聚体可以在凝胶成像中检测出来吗
可以，因为凝胶电泳是显示引物二聚体的一种极佳的方法。引物二聚体在凝胶的底部形成扩散条带，通常位于 100 bp 以下。单独采用凝没岩胶电泳分析进行验证的缺点在于，其灵敏度最低燃信仅达到纳克级，因此可能无法得出结果。
熔解曲线也是一种显示引物二聚体的放法。如果扩增具有极好的特异性，则实时荧光定量 PCR 板上每个反应枯段御孔的解离曲线将出现一个较窄的单峰。引物二聚体的荧光强度较低，呈较宽的「波形」
Q6：如何判断两个引物是否形成二聚体
PCR产物的电泳检测时间
一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。
假阴性，不出现扩增条带
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。
酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。
引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。