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中国七大干细胞库 细胞检测


中国七大干细胞库 细胞检测

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细胞检测(中国七大干细胞库)
细胞增殖是活细胞的重要生理功能之一，是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础 。细胞增殖的研究方法有很多 。那么，今天给大家分享的检测方法有哪些呢？不多说，往下看~
MTT检测MTT是一种黄色化合物，一种接受氢离子的染料 。它可以作用于活细胞线粒体中的呼吸链 。在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下，形成四氮唑环裂纹和蓝色甲状晶体 。甲晶体的量只与活细胞数成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，MTT无法还原) 。
实验方法:
接种XXX细胞:用含10%胎牛血清的培养基制备单细胞悬液，每孔接种1000-10000个细胞于96孔板，每孔体积200 L 。培养的细胞在相同的一般培养条件下培养3-5天(培养时间可根据试验目的和要求确定) 。在颜色培养3-5天后，向每个孔中加入20升MTT溶液(含PBS的5毫克/毫升) 。继续孵育4小时，停止培养，小心吸取并丢弃孔中的培养上清液，然后对悬浮细胞进行离心后吸取并丢弃孔中的培养上清液 。向每个孔中加入150 L DMSO，并摇动10分钟以完全溶解晶体 。选择490nm的比色波长，在酶联免疫传感器上测量各孔的吸光值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制细胞生长曲线 。
甲基四氮盐XTT是一种类似于MTT的四氮唑衍生物，可被活细胞的线粒体脱氢酶还原为水溶性棕色甲褶产物 。当XTT与电子偶合剂一起使用时，产生的甲襞量与细胞增殖程度正相关 。
实验方法:
首先，制备6.6 mmol/L XTT溶液和220 mmol/L吩嗪硫酸二甲酯(PMS)溶液 。XTT和PMS以1: 1的比例混合形成XTT/PMS 。XXX细胞:将含10%胎牛血清的培养基制成单细胞悬液，接种于1000信息资源网-10000细胞/孔的96孔板中，每孔体积200 L 。细胞培养:与一般培养条件相同，培养3-5天(培养时间可根据试验目的和要求确定) 。在培养终止前2小时，向每个孔中加入XTT/PMS 20L，混合后培养2小时 。在酶标仪上以655nm的参比波长在450 nm处测量光的吸光度 。
WST一号该方法是一种高灵敏度、高稳定性、无放射性的比色检测方法，用于测定细胞增殖或毒性试验中的活细胞数 。与MTT、XTT、MTS等其他四唑盐相比，实验的灵敏度更高，线性范围更宽 。
实验方法:
将100 L/的XXX细胞/信息源网(约1104个)加入到96孔板中，在5% CO2细胞培养箱中37℃培养24小时 。加入适当浓度的测试化合物 。将96孔板在37℃、5% CO2空气体和100%湿度的细胞培养箱中孵育适当的时间 。使用WST-1细胞增殖和细胞毒性测试试剂盒，向每个孔中加入10升四唑盐工作溶液 。37℃孵育1 ~ 4小时 。酶标仪在450nm波长下检测每个孔的光密度 。
八国集团(WST八国)CCK-8是近年来新发展起来的水溶性四氮唑盐检测方法 。其原理类似于WST-1:在电子载体1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯(1-甲氧基PMS)的作用下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为橙黄色的甲，水溶性高 。甲的量与活细胞数成正比，酶联免疫法测得的吸光值可以间接反映活细胞数，甲的量在一定的细胞数范围内与细胞数成正比 。
实验方法:
将细胞悬浮液(100 L/孔)接种到96孔板中 。培养板在培养箱(37℃，5% CO2)中预培养 。细胞被处理后 。在每个孔中加入10 L CCK溶液(注意不要在孔中产生气泡，这会影响OD值的读取) 。将培养板在培养箱中培养1-4小时 。用酶标仪测定450nm处的吸光度 。如果暂时不测OD值，可在每个孔中加入10L的0.1m HCl溶液或1%w/v SDS溶液，培养板可在室温下避光保存 。吸光度在24小时内不会改变 。
平板克隆形成平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁细胞 。合适的基质是玻璃、塑料瓶皿 。实验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度 。细胞一定要分散好，不能有细胞团，接种密度不能太高 。
实验方法:
取对数生长期单层培养的XXX细胞，用0.25%胰蛋白酶消化吹成单细胞，然后将细胞悬浮于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中备用 。将信息资源网用细胞悬液梯度倍数稀释，接种于适当细胞密度(根据增殖能力)的培养皿中 。一般以每皿50、100、200个细胞的梯度密度接种于含10ml 37℃预温培养液的培养皿中，轻轻旋转使细胞分散均匀 。将其置于37℃±5% CO2、饱和湿度的环境中，静置2 ~ 3周 。当培养皿中出现可见克隆时，培养终止 。丢弃上清液，小心浸泡并用PBS洗涤两次 。加入5mL纯甲醇或1:3的乙酸/甲醇，固定15分钟 。然后除去固定液，加入适量姬姆萨用染料溶液染色10 ~ 30 min，再用流水慢慢冲洗染料溶液，用空气体吹干 。将平板倒置，覆盖一层带网格的透明膜，肉眼直接计数克隆数，或显微镜下计数50个细胞以上的克隆数(低倍) 。最后，计算克隆形成率 。克隆率=克隆数/接种细胞数100% 。


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