纳斯卡|乙肝在研新药Cas9，法国科学家研发，靶向基因组永久性变化
【纳斯卡|乙肝在研新药Cas9，法国科学家研发，靶向基因组永久性变化】
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2020年欧洲肝脏学术研究年会（EASL 2020）上 ， 法国研究人员提出新型治疗慢性乙肝药物CRISPR/Cas9（基因编辑） 。 研究单位分别有里昂癌症研究中心（CRCL）、法国里昂INSERM U1052、法国埃沃泰克ID、里昂民用医院（HCL）、法国里昂里昂大学（IUF）、法国里昂UCBL等研究人员共同完成并发表 。
乙肝在研新药Cas9 ， 法国科学家研发 ， 靶向基因组永久性变化
基因编辑 ， 这种技术能够精准的剪断病毒DNA片段 ， 并插入新的基因片段 ， 是一种对病毒DNA核苷酸的序列进行定点修饰的技术 。 简单的讲 ， 基因编辑能够模拟基因自然突变 ， 还可以修改且编辑原有的病毒基因组 ， 基因编辑由此而得名 。 从国内外关于基因编辑这项技术研究来看 ， 主要是停留在临床前研究的项目较多 ， 但真正进入到人体临床试验的基因编辑还未见到 。
本届欧洲肝脏大会上 ， 法国研究人员指出 ， 由于慢性乙肝（CHB）的感染持续存在 ， 其主要原因是缺乏有效靶向稳定的HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）微小染色体的治疗方法 。 我们使用这项基因编辑新技术CRISPR/Cas9来靶向HBV基因组 ， 并研究了CRISPR/Cas9基因编辑后 ， 乙肝病毒复制模板cccDNA的命运 。
研究方法如下：法国研究人员在新感染HBV的HepG2细胞中 ， 建立核糖核蛋白（RNP）传递系统 ， 以表达HBV受体NTCP 。 建立感染后 ， 将RNP复合物导入 ， 以确保乙肝病毒模板cccDNA的靶向性 。 分析Cas9编辑后 ， HBV细胞外和细胞内参数 。 进行Southern印迹分析 ， 以确定cccDNA的存在和RNA测序来确定突变的cccDNA是否具有转录活性 。
研究结果表明 ， 在筛选不同的HBV特异性gRNAs时 ， 无论是单一的还是组合的 ， 基因编辑CRISPR/Cas9都能够有效地影响HBV的复制 。 研究人员根据HBV基因组中的靶点 ， CRISPR/Cas9能够导致HBV总DNA降解或突变 ， 这两者都导致乙肝病毒转录物减少 。 法国研究人员还发现 ， 除了cccDNA数量的轻微减少（可能是由于降解）之外 ， 通过PCR、southern blot和RNA-seq一致地观察到 ， 一个较小的cccDNA物种出现 。
从观察到较小cccDNA出现结果来看 ， 我们认为表明该物种具有转录活性 。 法国研究人员给出的研究结论是 ， 这种“小的cccDNA”是Cas9在两个靶位点同时诱导双链断裂 ， 随后修复较大片段的产物 。 CcDNA/cDNA复合物（CCrNs9）的添加 ， 确实降低了CcDNA/CcDNA的复制水平 。 总体来看 ， 这种乙肝新型治疗方法是一种基于基因编辑技术研发的乙肝潜力新药 。
小番健康结语：以上科学研究发表于欧洲肝脏研究学会年会(EASL2020)上 ， 由法国研究人员共同完成并接受发表 。 乙肝在研新药CRISPR/Cas9 ， 它能够靶向HBV可导致cccDNA的突变、断裂及修复 ， CRISPR/Cas9联用核苷（酸）类似物（NAs）的作用被证明是有效的 。 值得注意的是 ， Cas9诱导的效应是可持续的 ， 表明HBV基因组发生了永久性变化 。
法国研究人员指出 ， 不管gRNAs组合引起的截短 ， “小cccDNA”仍然具有转录活性 ， 并可能产生乙肝表面抗原（HBsAg） 。 研究人员认为 ， 这项基因编辑技术CRISPR/Cas9的进一步和长期的体内研究将是必要的 ， 以确定有效和不可逆的基因编辑（发表在EASL2020 ， CRISPR/Cas9靶向乙型肝炎病毒） 。
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