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层析柱保留时间怎么计算，层析柱床体积的概念怎么理解

生活经验层析

层析柱保留时间怎么计算
层析柱保留时间计算公式为Rt=t0（1+KVs/Vm），式中Rt表示某物质的保留时间 ， t0是色谱系统的死时间，即流动相进入色谱柱到流出色谱柱的时间，这个时间是色谱柱的孔隙、流动相的流速等因素决定 。
K是分配系数，Vs、Vm表示固定相和流动相的体积 。这个公式又叫做色谱过程方程，是色谱学最基本的公式之一 。保留时间是样品从进入色谱柱到流出色谱柱所需要的时间，不同的物质在不同的色谱柱上以不同的流动相洗脱会有不同的保留时间，因此保留时间是色谱分析法比较重要的参数之一 。另外，保留时间由物质在色谱中的分配系数决定 。
层析柱床体积的概念怎么理解1.5床体积/小时是体积流量！体积应该是底面积乘以柱高吧！一般好像用L升或ml毫升表示！关于层析柱找到以下资料：你看看用的上吗？层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管 。
层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上 。
此外，直径加大，洗脱液体体积增大 ， 样品稀释度大 。
【层析柱保留时间怎么计算，层析柱床体积的概念怎么理解】分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米 。
分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米 ， 柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍 。
分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米 。
层析柱滤板下的死体积应尽可能的小 ， 如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形 ， 出现拖尾出象，降低分辩力 。
在精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000 。
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多肽物质分离与分析方法研究进展

浏览次数： 47  日期： 2017-05-24 15:17:02
多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物学活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向 。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关 。随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高 。一些新方法、新思路的应用，不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中 。本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展 。
分离方法

采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定 。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等 。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、电泳等 。
1、 高效液相色谱（HPLC）

HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其他化合物相比 ， 在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽 。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作 。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容 。
1)  反相高效液相色谱（RP-HPLC）

结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况 。为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中 ， 可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间 。而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间 。同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响 ， 并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件 。

肽图分析(Peptide Mapping):肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶［一般为肽链内切酶（endopeptidase)］作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱 。肽图分析对多肽结构研究和特性鉴别具有重要意义 。利用胰蛋白酶能特意性作用于Arg和Lys羧基端的肽链的性质 ， 通过RP-HPLC法采用C18柱检测了重组人生长激素（rhGH）的肽片断，成功获得了人生长激素特征性胰肽图谱 。同时胰岛素的肽图经V8酶专一裂解也制得，并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾的不同种属来源的胰岛素 。人类肿瘤坏死因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线分析技术确定了肽图，便于鉴定分析 。此项技术已经在新药开发中得到广泛应用 。


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