分子病理检测包括哪些 _如何检测

分子病理检测这种做法可能很多人都不知道这种检查方法是利用核酸分子的互补原则进行检查，将有放射性的元素注射到体内，从而检测出DNA的排列组成，而且是我们进行亲子鉴定最为关键的做法。分子病理检测的方法有原位杂交、荧光原位杂交以及染色体异位杂交等技术，都是比较先进的医学方法。

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一、目前常用的分子病理检测技术有：
原位杂交(ISH)
【分子病理检测包括哪些】原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000) 。
荧光原位杂交(FISH)
FISH技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是：如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。
实验流程：FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→(染色体显带)→荧光显微镜检测→结果分析。

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基因突变检测
基因突变检测在分子靶向治疗筛选适用人群中起决定性作用，如检测肺腺癌组织EGFR、KRAS基因突变，结直肠癌KRAS、BRAF、PI3K基因突变，胃肠道间质瘤(GIST)、c-KIT、PDGFRA基因突变，是选择易瑞沙、爱必妥、格列卫等分子靶向治疗药物的前提。
目前的检测方法有DNA序列测定、实时PCR(real-time PCR)技术和焦磷酸测序、高分辨率溶解曲线、ARMS法等。检测方法各有优缺点，实际工作中应结合样本及检测方法的特点，选择合适的检测方法以提高准确性。
染色体异位检测
染色体异位是指2条非同源染色体同时发生断裂，所形成的断裂片段移至另一条染色体断端，并连接形成新染色体，常见于淋巴造血系统肿瘤及骨和软组织肉瘤中。
由于染色体异位具有特异性，为非随机性，对肿瘤具有鉴别诊断意义。例如染色体异位t(X;18)(p11.2;q11.2)及其导致的SYT-SSX基因融合是滑膜肉瘤的分子遗传学特征，检测SYT-SSX融合基因及其产物有助于滑膜肉瘤的鉴别诊断。
流式细胞技术
流式细胞技术(flow cytometry,FCM)是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。
流式细胞技术的应用：
1.其测定细胞内DNA的变异系数最小，一般在2%以下;
2.能准确地进行DNA倍体分析;
3.借助于荧光染料进行细胞内蛋白质和核酸的定量研究;
4.快速进行细胞分选和细胞收集;
5.医学应用：免疫功能研究各种干细胞的检测，癌症病人的多药耐药性，细胞功能及代谢动力学研究，血小板分析(心血管疾病)，流式细胞术与分子生物学研究;
6.应用于外周血内皮细胞测定、调节性T细胞等尖端领域。

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二、目前临床应用的分子病理检测项目有：
1.肿瘤相关病毒感染检测：一些肿瘤与特定的肿瘤相关病毒感染关系密切，如人类疱疹病毒(EB病毒)与鼻咽癌、NK/T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤，高危型人乳头状病毒(HPV)与宫颈癌等，这些病毒的相关分子成份可通过分子生物学方法检测出来。
2.淋巴瘤基因重排及染色体易位：单克隆性淋巴细胞受体基因重排是淋巴系统肿瘤的典型特征，可通过PCR技术检测出来。同时，一些淋巴瘤亚型存在特定的染色体易位，可通过FISH、PCR等方法进行检测用于辅助鉴别诊断。
3.软组织肉瘤鉴别诊断：软组织肉瘤存在特征性的染色体易位，可通过FISH、RT-PCR等方法检测出来，用于鉴别诊断。
4.HER2、EGFR基因状态及ALK易位等检测：FISH检测HER2、EGFR基因扩增状态及ALK易位，可以指导乳腺癌、胃癌、肺癌患者进行靶向治疗。