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全自动血球计数仪 血球计数仪


全自动血球计数仪 血球计数仪

文章插图
血细胞计数器(自动血细胞计数器)
看下降的详细解释！
01清洁实验环境
在层流安全柜内彻底喷洒消毒剂，并用纸巾擦拭 。将用过的纸巾放入合适的垃圾桶 。
向安全柜内喷70%乙醇，用纸巾擦拭 。安全柜现在已经清洁，可以使用了 。
02细胞悬浮液的处理
从冰箱中取出细胞培养基和胰蛋白酶，放入37℃的二氧化碳培养箱中加热 。
使用显微镜观察要计数的细胞，并检查是否有可见的细菌和真菌污染迹象 。
用70%乙醇喷洒培养基瓶和移液管，并将其放入安全柜中 。
轻轻摇动培养瓶，确保悬浮细胞充分混合 。
在悬浮细胞沉淀之前，取0.5毫升细胞悬液样品，储存在无菌微量离心管中 。
去除粘附细胞上的残余培养基 。
室温下用DPBS溶液洗涤，加入EDTA胰蛋白酶分离细胞(DPBS溶液和蛋白酶用量见表) 。
放入37℃的二氧化碳培养箱中2~5分钟 。(培养时间取决于细胞类型) 。
取出后在倒置显微镜下观察 。发现细胞突起回缩，细胞间隙增大，细胞从培养瓶底部分离成单个细胞 。
所有细胞分离后，EDTA胰蛋白酶在含10%胎牛血清的培养基中于37℃中和(见剂量表) 。

上下摇动细胞悬液三次，使细胞复活，然后转移到15 ml试管中 。
在室温下，将细胞悬浮液以每分钟1000转的速度离心5分钟 。
离心后，弃去细胞悬浮液 。
【全自动血球计数仪 血球计数仪】但经过信息资源网，细胞颗粒用含10%胎牛血清的培养基在37℃悬浮至原培养体积 。
用5 ml无菌移液管吸取0.5 ml细胞悬液样品，并转移至无菌微量离心管中 。
03准备血细胞计数器
如果使用玻璃血细胞计数器和盖玻片，请在使用前用酒精清洗 。用水打湿盖玻片信息资源网，将盖玻片固定在血细胞计数器上 。如果盖玻片下出现牛顿折射环，说明盖玻片贴对了 。
如果使用的是一次性血细胞计数器(如INCYTO DHC-N01)，请在使用前将其从包装中取出 。
04开始计数 。
将100 L细胞放入新的微量离心管中，加入400 L 0.4%台盼蓝(终浓度0.08%)，轻轻混合 。
小心地将一滴悬浮液滴入计数室的孔中，以便细胞悬浮液可以通过毛细管作用被吸入 。
使用倒置显微镜，在10x物镜下聚焦血细胞计数器的4*4网格线 。计数未染色的活细胞 。
计数时，只计算框内或右下边界的单元格 。
同理，如有必要，可对台盼蓝染色的死细胞进行计数，以估计活细胞的比例 。
将血细胞计数器移至下一组方块(16)，继续计数，直到所有四组方块(每组16个)都计数完毕 。
计算活细胞的数量 。
计算每组正方形(16)中细胞计数的平均值，并记录它们的值，以计算细胞浓度 。
取4组16个方块的活细胞平均数乘以10000，得到每毫升的细胞数 。
当加入锥虫蓝时，乘以5以校正1:5的稀释度 。最终值是原始细胞悬液中活细胞的数量/mL 。示例:
如果每16个方格的细胞数为50，40信息资源网，45，52，则平均细胞数为:
(50 + 40 + 45 +52) 4 = 46.75
46.75 x 10000 (104) = 467500
原始细胞悬液中467500×5 = 2337500活细胞/毫升
06计算细胞活力 。
将活细胞数和死细胞数相加，得到细胞总数 。
通过将细胞计数除以总细胞计数来计算活性百分比 。
示例:
细胞计数:2337500个细胞/毫升
死亡细胞计数:50000个细胞/毫升
237500+50000 = 2387500个单元格
237500 2387500 = 97.9%生命力
-结束-


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