hek293是什么细胞
HEK293细胞系 , 又称hek293、hek293、293细胞 , 是1973年产生的人胚肾293细胞 。顾名思义,它们是一种典型的细胞系,起源于人体胚胎肾细胞 。最初 , 这些细胞是从健康流产的胎儿中合法提取的 。
细胞体形极微 , 在显微镜下始能窥见,形状多种多样 。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜 。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体 。动物细胞无细胞壁,细胞质中常有中心体 , 而高等植物细胞中则无 。细胞有运动、营养和繁殖等机能 。
cho细胞转染试剂盒CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞,是目前表达外源蛋白最多最成功的细胞之一 。该细胞属于成纤维细胞,是一种非分泌型细胞,自身很少分泌内源蛋白 , 因此有利于目的蛋白的纯化分离
HEK293细胞是真核蛋白表达常用的细胞之一,它具有以下优势: 更快的生长速度,更高的生长密度、转染效率和外源蛋白表达量
各有各的优缺,但是都是很常用的细胞,无论选择哪个基本都会成功吧
肾脏细胞结构图HEK-293T细胞是293T(293tsA1609neo)细胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物 。细胞持续表达SV40抗原,该细胞常用于转染实验,转染效率较高 。(转染一般以50%密度铺板,待细胞刚刚贴到皿壁上后(一般8-10小时),即可进行转染操作)
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清 , 10% 。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5% 。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80% 。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配 。液氮储存 。
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀 。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀 。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜) 。第二天换液并检查细胞密度 。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次 。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟 , 然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化 。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出 , 在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀 。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中 。
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染 , 请立即与我们联系 。
2.收到细胞先不开瓶盖 , 瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态 。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片 , 观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态 , 100,200 各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况 。作为我方进行销售依据 。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明 , 期间间隔时间不能大于7天 。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作 , 并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃 。
文章插图
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